Методика определения активности ЦПМатериалы / Антиоксидантная система плазмы крови в норме и при патологии / Материалы и методы / Методика определения активности ЦП
Определение церулоплазмина в плазме крови модифицированным методом Ревина [].
Принцип метода основан на окислении р-фенилендамина при участии церулоплазмина [Камышников, 2000].
Реактивы:
1. 0.5 %-ный водный раствор солянокислого р-фенилендиамина.
2. 0.4 М ацетатный буфер, рН 5.5. Готовят из двух растворов:
1) 54.44 г ацетата натрия растворяют в 1л дистиллированной воды;
2) 22.6 мл ледяной уксусной кислоты доводят до 1л.
Полученные растворы смешивали в отношении 9:1 в большом количестве.
3. 3%-ный раствор фтористого натрия. После растворения соли в дистиллированной воде раствор профильтровывают.
Ход определения:
В пробирки вносят по 8 мл ацетатного буфера и 0.1 мл плазмы. В контрольную пробирку добавляют 2мл раствора фтористого натрия (для инактивации ферментативной активности церулоплазмина). Затем во все пробирки вносят по 1 мл раствора р-фенилендиамина (используемого в качестве субстрата). Пробирки встряхивают, помещают в термостат и инкубируют в течение часа при температуре 37 ?С. После инкубации во все пробирки (за исключением контрольной) добавляют по 2 мл раствора фтористого натрия. Содержимое пробирок перемешивают, затем их переносят в холодильник, где выдерживают 30 мин при 4?С. Пробы колориметрируют против контроля (бледно-розовой окраски) в кюветах с шириной слоя 1,0 см при ? = 530 нм.
Умножая значение оптической плотности на коэффициент пересчета 875, получают величину концентрации церулоплазмина в мг/л.
Статистическая обработка результатов
Обработка эксперементальных данный проводилась общепринятыми методами [Лакин, 1980].
Смотрите также
Трепетание и мерцание желудочков
Трепетание и мерцание
желудочков – агональные, не совместимые с жизнью нарушения ритма,
сопровождающиеся прекращением эффективного кровообращения.
Диагноз. У больного развивается шок,
наступает ...
Заключение
Беременность,
это не болезнь, а нормальное физиологическое состояние женщины в детородный
период. Во время беременности ей особенно надо уделить внимание рациону
питания, режиму труда и отдыха, а т ...
Пороки сердца
Пороками сердца называют
грубые изменения его анатомического строения, например, неправильное отхождение
от сердца или впадение в него крупных сосудов; патологические отверстия
(дефекты) в перегоро ...
Разделы сайта
Дополнительные материалы
Ароматерапия ...
Ароматерапия, являющаяся неотъемлемой частью медицины и фармации …
БАД сегодня …
Какая взаимосвязь между здоровьем человека и особенностями его питания …
Биотехнология …
Биотехнология как новое направление в фармацевтической технологии …